Plasmide CRISPR d'Activation (h) MRTF-B: sc-401793-ACT

Le gène humain **MKL2** code le facteur de transcription apparenté à la myocardine B (**MRTF‑B**), un coactivateur sensible à la dynamique **RhoA–actine** qui s’associe à **SRF** pour réguler des programmes géniques du cytosquelette contrôlant la forme cellulaire, la migration et la contractilité. L’activité de MRTF‑B intègre des signaux issus de la polymérisation de l’actine et de la mécanotransduction afin de moduler des réseaux transcriptionnels impliqués dans le développement du muscle lisse et du système cardiovasculaire, ainsi que dans le remodelage tissulaire. Une dérégulation de la signalisation **MKL2/MRTF‑B–SRF** a été associée à une transition épithélio‑mésenchymateuse aberrante, à un comportement invasif et à des réponses fibroprolifératives dans plusieurs systèmes modèles. En tant que nœud reliant le remodelage de l’actine à la sortie transcriptionnelle, MRTF‑B est largement étudié dans les voies qui régissent l’adhérence, la formation de fibres de stress et la régulation de la matrice extracellulaire.

MRTF-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MKL2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MRTF-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MKL2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MKL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MRTF-B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MKL2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MRTF-B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MRTF-B dans les cellules tumorales présentant une expression de MKL2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.