Plásmido CRISPR de Activación (m) MRP-S25: sc-425723-ACT

Mrps25 codifica la proteína ribosomal mitocondrial murina MRP-S25, un componente de la subunidad pequeña del mitorribosoma necesaria para la traducción de subunidades de fosforilación oxidativa codificadas por el genoma mitocondrial. Al sostener la síntesis de proteínas mitocondriales, MRP-S25 contribuye al ensamblaje de la cadena respiratoria, a la producción de ATP y al mantenimiento del potencial de membrana mitocondrial, lo que la vincula con vías centrales de bioenergética y proteostasis. La alteración de proteínas mitorribosomales puede deteriorar la fosforilación oxidativa y aumentar las especies reactivas de oxígeno, procesos implicados en fenotipos neuromusculares y metabólicos, así como en respuestas al estrés relevantes para el metabolismo de células cancerosas. Por ello, la regulación de Mrps25 es de interés para estudiar el control de la traducción mitocondrial y sus efectos posteriores sobre la aptitud celular.

MRP-S25 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Mrps25 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MRP-S25 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Mrps25 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Mrps25, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MRP-S25. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Mrps25 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MRP-S25 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MRP-S25 en células tumorales con expresión de Mrps25 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.