Plasmide CRISPR d'Activation (h) MPZL1: sc-407478-ACT

MPZL1 (myelin protein zero-like 1), également connu sous le nom de PZR, code une protéine transmembranaire de la superfamille des immunoglobulines qui sert d’échafaudage pour la signalisation des phosphatases à tyrosine, notamment via SHP2 (PTPN11). Grâce à ses motifs cytoplasmiques ITIM, MPZL1 module des voies dépendantes de la phosphorylation qui contrôlent l’adhérence cellulaire, l’étalement, la migration et le remodelage du cytosquelette, en intégrant des signaux provenant des récepteurs à activité tyrosine kinase et des interactions avec la matrice extracellulaire. La signalisation associée à MPZL1 a été reliée à la régulation de la dynamique des adhésions focales et de l’activité de la voie MAPK/ERK, influençant des phénotypes prolifératifs et migratoires dans divers contextes cellulaires. Une expression ou une signalisation dérégulée de MPZL1 a été rapportée dans des processus pertinents en oncologie, tels que l’invasion et les comportements associés aux métastases, ce qui appuie son utilisation dans des études mécanistiques des réseaux de signalisation et des phénotypes pilotés par l’adhérence.

MPZL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MPZL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MPZL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MPZL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MPZL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MPZL1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MPZL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MPZL1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MPZL1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MPZL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.