Plásmido CRISPR de Activación (h) MPP3: sc-407044-ACT

La MPP3 humana (proteína de membrana palmitoilada 3), también conocida como miembro 3 de la subfamilia MAGUK p55, es una proteína andamiaje de la familia de las guanilato quinasas asociadas a membrana que ayuda a organizar complejos proteicos en la membrana plasmática. A través de sus dominios PDZ, SH3 y GK, MPP3 favorece el ensamblaje de componentes de uniones y de señalización que regulan la polaridad epitelial, la adhesión célula–célula y el acoplamiento al citoesqueleto. Estas funciones sitúan a MPP3 dentro de vías que controlan la estabilidad de las uniones y el tráfico de membrana, procesos que con frecuencia se alteran durante la progresión tumoral y la metástasis. La expresión o localización desregulada de andamios MAGUK, incluida MPP3, se ha relacionado con cambios en la integridad de la barrera y en las salidas de señalización relevantes para la biología del cáncer y la homeostasis tisular.

MPP3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MPP3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MPP3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MPP3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MPP3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MPP3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MPP3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MPP3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MPP3 en células tumorales con expresión de MPP3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.