MOG Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402717-ACT

A glicoproteína da mielina do oligodendrócito (MOG) é uma proteína de superfície da mielina do SNC, enriquecida nos prolongamentos dos oligodendrócitos e nas lamelas mais externas da bainha de mielina, contribuindo para a integridade da mielina e para as interações axônio–glia. Como um antígeno de membrana altamente acessível no compartimento de mielina, a MOG é amplamente utilizada para investigar o reconhecimento imune da mielina do SNC e os mecanismos que regulam a desmielinização e a remielinização. Respostas imunes alteradas direcionadas à MOG e mudanças em programas de genes associados à mielina são relevantes para doenças desmielinizantes inflamatórias e para a patologia neuroinflamatória, sustentando seu uso em estudos de biologia de oligodendrócitos, apresentação de antígenos e lesão da substância branca. A modulação experimental da expressão de MOG pode ajudar a dissecar vias que governam a manutenção da mielina, a ativação microglial e a comunicação cruzada neuroimune.

MOG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MOG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MOG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MOG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MOG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MOG. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MOG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MOG no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MOG em células tumorais com expressão de MOG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.