Plasmide CRISPR/Cas9 KO MOB2 (h): sc-413424

Présentation

MOB2 (activateur de kinase MOB 2) est une protéine adaptatrice conservée qui interagit avec les kinases de la famille NDR/LATS afin de moduler la signalisation liée à Hippo, en influençant des cascades de phosphorylation qui régissent la prolifération cellulaire, l’apoptose et l’organisation du cytosquelette. En régulant l’activité des kinases et la localisation subcellulaire des composants de la voie, MOB2 contribue au contrôle de la progression du cycle cellulaire, de la polarité et de la croissance dépendante du contact. Une dérégulation de la signalisation Hippo/NDR est fréquemment impliquée dans des phénotypes oncogéniques, et une altération de la fonction de MOB2 a été associée à des perturbations des réseaux suppresseurs de tumeurs et du contrôle de la prolifération. MOB2 est donc pertinente pour étudier les mécanismes reliant la régulation des kinases à l’homéostasie tissulaire et au remodelage des voies de signalisation associé aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MOB2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MOB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MOB2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MOB2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MOB2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MOB2 pour l'étude de la signalisation de MOB2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MOB2 essentiels à la fonction de MOB2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MOB2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MOB2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MOB2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MOB2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MOB2 plasmide HDR (h) et le MOB2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MOB2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MOB2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.