Plasmide CRISPR d'Activation (h) MMP-3: sc-400727-ACT

Le gène humain **MMP3** code la **métalloprotéinase matricielle-3** (MMP-3, stromélysine-1), une endopeptidase sécrétée dépendante du zinc qui remodèle la matrice extracellulaire en clivant les protéoglycanes, la fibronectine, la laminine et d’autres composants de la matrice. MMP-3 peut également activer d’autres zymogènes de MMP, amplifiant des cascades protéolytiques qui influencent la migration cellulaire, la réparation tissulaire, l’angiogenèse et la signalisation inflammatoire au sein du milieu extracellulaire. Son expression est régulée en aval de voies sensibles aux cytokines et aux facteurs de croissance, notamment les programmes **NF-κB** et **AP-1/MAPK**, reliant le renouvellement de la matrice aux états d’activation immunitaire et stromale. Une activité dérégulée de MMP3 a été associée au remodelage pathologique de la matrice observé dans l’arthrite, les maladies cardiovasculaires, la fibrose et la biologie de l’invasion tumorale, ce qui en fait un marqueur largement utilisé et un nœud mécanistique important dans les recherches centrées sur le microenvironnement.

MMP-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MMP3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MMP-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MMP3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MMP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MMP-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MMP3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MMP-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MMP-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de MMP3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.