Plasmide CRISPR/Cas9 KO MMD (m): sc-426581

Présentation

Mmd code pour MMD, une protéine membranaire multipasse enrichie au niveau de l’appareil de Golgi et du système endomembranaire, associée à la maturation de la lignée myéloïde et à la biologie des cellules de l’immunité innée. Des études suggèrent que MMD participe à la régulation du trafic membranaire et des signaux en aval qui modulent les réponses inflammatoires, avec des liens notamment avec les voies MAPK/ERK et des voies associées aux cytokines dans les macrophages et des types cellulaires apparentés. Une expression altérée de MMD a été rapportée dans divers contextes immunitaires et tumoraux, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour étudier l’interface entre les programmes myéloïdes, le stress cellulaire et les signaux du microenvironnement. Dans des modèles murins, la perturbation de MMD permet de disséquer la signalisation spécifique de lignée et les phénotypes d’inflammation à l’échelle des organes, sans en tirer d’inférences thérapeutiques ou cliniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MMD (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mmd dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mmd, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mmd à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MMD.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mmd pour l'étude de la signalisation de MMD, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Mmd essentiels à la fonction de MMD
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mmd pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MMD plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MMD plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mmd. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MMD plasmide HDR (m) et le MMD (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mmd pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mmd définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.