MLTK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-437372
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- MLTK Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im MLTK-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MLTK: sc-390924
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MLTK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-437372 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Map3k20 kodiert die Mixed-Lineage-Kinase-ähnliche Proteinkinase (MLTK), eine Serin/Threonin-MAP3K, die vorgeschaltete Stress- und Entzündungssignale mit MAPK-Signalkaskaden verknüpft, einschließlich der JNK- und p38-Wege. Durch die Phosphorylierung nachgeschalteter MAP2Ks trägt MLTK zur Regulation transkriptioneller Programme bei, die Apoptose, Zytoskelett-Umbau und die zelluläre Anpassung an Umweltstress steuern. In Mausmodellen wurde die Aktivität von Map3k20 mit Zellschicksalsentscheidungen als Antwort auf genotoxischen und oxidativen Stress in Verbindung gebracht und kann Signalknoten beeinflussen, die sich mit Signalwegen der angeborenen Immunität und der Gewebehomöostase überschneiden. Eine fehlregulierte Verschaltung von MAPK-Signalwegen unter Beteiligung von MAP3Ks wie MLTK ist für Modelle der Neurodegeneration, entzündlicher Pathologien und krebsassoziierter Stresssignalgebung breit relevant, wodurch Map3k20 ein nützliches Ziel für mechanistische Analysen darstellt.
Das MLTK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Map3k20-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Map3k20-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Map3k20 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MLTK-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Map3k20-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MLTK-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Map3k20-Exone abzielen, die für die MLTK-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Map3k20-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom MLTK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom MLTK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Map3k20-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MLTK HDR-Plasmid (m) und MLTK HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Map3k20-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Map3k20-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.