Partículas Lentivirales de Activación (h) MLL3: sc-402052-LAC

KMT2C (MLL3) codifica una metiltransferasa de lisina de histonas que contiene un dominio SET y que cataliza principalmente la monometilación de H3K4 en potenciadores (enhancers), modelando la comunicación potenciador–promotor y el resultado transcripcional. Como componente central de complejos tipo COMPASS, MLL3 integra señales de la cromatina para regular la especificación de linaje, los programas de diferenciación y la expresión génica sensible a estímulos en múltiples contextos de señalización. La alteración de KMT2C se observa con frecuencia en estudios genómicos del cáncer y también se ha implicado en una regulación epigenética anómala en trastornos del desarrollo y neurobiológicos, lo que refleja su papel en el mantenimiento de la homeostasis transcripcional. Estas propiedades convierten a MLL3 en un nodo clave para estudiar la regulación de potenciadores, la arquitectura de la cromatina y el control transcripcional dependiente del contexto en células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MLL3 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de KMT2C en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MLL3 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción KMT2C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MLL3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo KMT2C y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.