MLF1IP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-413208

Descripción general

CENPU codifica la proteína centromérica U (MLF1IP), un componente central del complejo CENP-O/P/Q/U, necesario para el ensamblaje correcto del cinetocoro y la unión estable de los microtúbulos durante la mitosis. MLF1IP favorece la alineación (congresión) y la segregación precisas de los cromosomas, ayudando a mantener la estabilidad genómica mediante una progresión ordenada del ciclo celular y procesos asociados al punto de control del huso mitótico. La alteración o desregulación de factores del centrómero/cinetocoro puede impulsar la segregación incorrecta de cromosomas y la aneuploidía, lo que vincula la función de CENPU con mecanismos comúnmente asociados a fenotipos de enfermedades proliferativas. Como regulador mitótico, CENPU se estudia con frecuencia en el contexto del control de la división celular, las vías de inestabilidad cromosómica y la reprogramación del ciclo celular relacionada con el cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MLF1IP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CENPU en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CENPU junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CENPU tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MLF1IP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CENPU para la investigación de la señalización de MLF1IP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CENPU críticos para la función de MLF1IP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CENPU para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MLF1IP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MLF1IP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CENPU. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MLF1IP (h) y el plásmido HDR MLF1IP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CENPU para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CENPU definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.