Plásmido CRISPR de Activación (h) ML-IAP: sc-403976-ACT

BIRC7 codifica ML-IAP (también conocida como livin), un miembro de la familia de proteínas inhibidoras de la apoptosis (IAP) que suprime la muerte celular programada al unirse e inhibir caspasas efectoras como CASP3, CASP7 y CASP9. A través de sus dominios BIR y RING, ML-IAP puede modular la señalización de la apoptosis y el recambio proteico dependiente de ubiquitina, configurando las respuestas celulares a señales de muerte intrínsecas y extrínsecas. La expresión desregulada de BIRC7 se ha asociado con resistencia a la apoptosis y con una señalización del estrés alterada en múltiples contextos de cáncer, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de vías de supervivencia. En entornos de investigación, ML-IAP se examina con frecuencia junto con la señalización de TNF, la regulación mitocondrial de la apoptosis y las redes de proteostasis celular.

ML-IAP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BIRC7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ML-IAP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BIRC7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BIRC7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ML-IAP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BIRC7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ML-IAP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ML-IAP en células tumorales con expresión de BIRC7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.