Mitochondrial Topo I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-408700
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Mitochondrial Topo I Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Mitochondrial Topo I-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Mitochondrial Topo I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-408700 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
TOP1MT kodiert die mitochondriale DNA-Topoisomerase I, eine Topoisomerase vom Typ IB, die die während der mtDNA-Replikation und -Transkription entstehende torsionale Spannung durch das vorübergehende Einführen von Einzelstrangbrüchen und anschließendes Wiederverknüpfen abbaut. Durch die Aufrechterhaltung der Topologie des mitochondrialen Genoms unterstützt TOP1MT die mitochondriale Genexpression, die Organisation der Nukleoide und die Leistungsfähigkeit der oxidativen Phosphorylierung. Eine Störung der TOP1MT-Funktion wurde mit veränderter mtDNA-Integrität, beeinträchtigter Leistungsfähigkeit der Atmungskette und erhöhter Empfindlichkeit gegenüber mitochondrialem Stress in Verbindung gebracht. Diese Prozesse sind relevant für Studien zur mitochondrialen Dysfunktion bei Neurodegeneration, kardiometabolischen Erkrankungen und der Bioenergetik von Krebszellen.
Das Mitochondrial Topo I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TOP1MT-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TOP1MT-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TOP1MT nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Mitochondrial Topo I-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TOP1MT-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Mitochondrial Topo I-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf TOP1MT-Exone abzielen, die für die Mitochondrial Topo I-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere TOP1MT-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Mitochondrial Topo I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Mitochondrial Topo I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TOP1MT-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Mitochondrial Topo I HDR-Plasmid (h) und Mitochondrial Topo I HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TOP1MT-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TOP1MT-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.