Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO MIS (m): sc-419100
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- MIS Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique MIS, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MIS Antibody (B-11): sc-166752
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO MIS (m) | sc-419100 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Amh code pour l’hormone anti-müllérienne (MIS), une glycoprotéine de la superfamille du TGF‑β surtout connue pour réguler la régression des canaux de Müller durant le développement embryonnaire mâle. La MIS transmet principalement son signal via AMHR2, associé à des récepteurs de type I, afin d’activer des programmes transcriptionnels dépendants de SMAD1/5/8 qui orientent la morphogenèse de l’appareil reproducteur et la fonction gonadique. Dans l’ovaire, l’AMH contribue à la folliculogenèse en modulant le recrutement des follicules primordiaux et la réponse à la FSH, ce qui l’associe à la régulation endocrine et à des phénotypes liés à la fertilité. Des altérations de la signalisation AMH/MIS ont été exploitées pour étudier les troubles du développement sexuel, la biologie des cellules de la granulosa et les voies contrôlant la différenciation tissulaire.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MIS (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Amh dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Amh, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Amh à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MIS.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Amh pour l'étude de la signalisation de MIS, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Amh essentiels à la fonction de MIS
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Amh pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le MIS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MIS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Amh. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le MIS plasmide HDR (m) et le MIS (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Amh pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Amh définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.