MIS Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400715-ACT

O hormônio anti-Mülleriano (AMH), também conhecido como substância inibidora mülleriana (MIS), é um ligante secretado da superfamília TGF-β que sinaliza principalmente por meio do AMHR2 e de receptores do tipo I para ativar a transcrição dependente de SMAD1/5/8. No desenvolvimento humano, o AMH/MIS é essencial para a diferenciação sexual masculina ao promover a regressão dos ductos de Müller e, no adulto, contribui para a comunicação entre células gonadais e para a regulação da foliculogênese. A expressão de AMH é amplamente utilizada como marcador do estado de células de Sertoli e da granulosa, relacionando-se à regulação endócrina e à biologia dos tecidos reprodutivos. A sinalização ou expressão desregulada de AMH/MIS tem sido associada a distúrbios do desenvolvimento sexual, a fenótipos alterados de reserva ovariana e à biologia de tumores gonadais, sustentando estudos mecanísticos de vias do desenvolvimento e da reprodução.

MIS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AMH sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MIS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AMH em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AMH, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MIS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AMH nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MIS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MIS em células tumorais com expressão de AMH silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.