Mindin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417294

Descripción general

SPON2 codifica mindina, una glicoproteína secretada de la matriz extracelular que funciona como molécula de reconocimiento de patrones y de adhesión, vinculando la detección inmunitaria innata con las interacciones célula–matriz. La mindina se une a componentes microbianos y a receptores de integrinas, favoreciendo el reclutamiento de leucocitos, la activación de macrófagos y la modulación de vías de señalización inflamatoria como NF-κB y las redes de citocinas aguas abajo. En microambientes estromales y vasculares, SPON2 contribuye a la organización de la matriz extracelular, a los gradientes quimiotácticos y a procesos de remodelación tisular que influyen en las interacciones tumor–sistema inmune. Se ha informado una expresión desregulada de SPON2 en múltiples contextos inflamatorios y oncogénicos, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de vigilancia inmunitaria, remodelación asociada a fibrosis y señalización del microambiente.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Mindin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SPON2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SPON2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SPON2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Mindin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SPON2 para la investigación de la señalización de Mindin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SPON2 críticos para la función de Mindin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SPON2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Mindin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Mindin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SPON2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Mindin (h) y el plásmido HDR Mindin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SPON2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SPON2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.