Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Mimitin Double Nickase Plasmid (h): sc-410509-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Mimitin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Mimitin Double-Nickase-Plasmid (h) und Mimitin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NDUFAF2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Mimitin: sc-365592
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Mimitin Double Nickase Plasmid (h) | sc-410509-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Mimitin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-410509-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NDUFAF2 (Mimitin) ist ein Assemblierungsfaktor der mitochondrialen Matrix, der für die korrekte Biogenese des Atmungskettenkomplexes I (NADH:Ubiquinon-Oxidoreduktase) erforderlich ist. Durch die Unterstützung der Reifung und Stabilität von Komplex I trägt Mimitin zur oxidativen Phosphorylierung, zur Aufrechterhaltung des mitochondrialen Membranpotenzials und zur Kontrolle des zellulären Redoxgleichgewichts bei, das Stoffwechsel- und Stressantwortwege beeinflusst. Störungen der Komplex-I-Assemblierung können reaktive Sauerstoffspezies erhöhen und die ATP-Produktion beeinträchtigen, wodurch eine NDUFAF2-Dysfunktion mit mitochondrialer Pathophysiologie und energieabhängigen Geweben in Verbindung gebracht wird. Als nukleär kodierter Regulator der mitochondrialen Funktion wird NDUFAF2 häufig im Kontext metabolischer Umprogrammierung, der mitochondrialen Qualitätskontrolle und der Mechanismen untersucht, die Komplex-I-assoziierten Erkrankungen zugrunde liegen.
Mimitin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NDUFAF2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NDUFAF2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NDUFAF2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NDUFAF2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.