mHMGCS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403941

Übersicht

HMGCS2 kodiert die mitochondriale 3‑Hydroxy‑3‑methylglutaryl‑CoA‑Synthase (mHMGCS), das geschwindigkeitsbestimmende Enzym der Ketogenese, das die Bildung von HMG‑CoA aus Acetoacetyl‑CoA und Acetyl‑CoA katalysiert. Es verknüpft die hepatische β‑Oxidation von Fettsäuren mit der Produktion von Ketonkörpern während Fasten und metabolischem Stress und beeinflusst dadurch die mitochondriale Energiehomöostase sowie das Redoxgleichgewicht. Die Aktivität von HMGCS2 ist in PPARα‑gesteuerte Transkriptionsprogramme und nährstoffsensitive Signalwege eingebettet, die Lipidverwertung, gluconeogenen Flux und oxidativen Stoffwechsel koordinieren. Eine Fehlregulation von HMGCS2 wurde sowohl mit angeborenen Störungen der Ketonkörpersynthese als auch mit veränderten metabolischen Phänotypen in Studien zu Lebererkrankungen und zum Tumorstoffwechsel in Verbindung gebracht.

Das mHMGCS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HMGCS2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HMGCS2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HMGCS2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die mHMGCS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HMGCS2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der mHMGCS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HMGCS2-Exone abzielen, die für die mHMGCS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HMGCS2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom mHMGCS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom mHMGCS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HMGCS2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das mHMGCS HDR-Plasmid (h) und mHMGCS HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HMGCS2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HMGCS2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.