Plasmide CRISPR d'Activation (h) MGP: sc-401556-ACT

La MGP humaine (matrix Gla protein) est une protéine de la matrice extracellulaire, sécrétée et dépendante de la vitamine K, surtout connue pour inhiber la minéralisation ectopique en se liant au calcium et en régulant le dépôt d’hydroxyapatite. Elle est particulièrement pertinente en biologie vasculaire, où elle module des programmes de signalisation ostéogénique dans les cellules musculaires lisses vasculaires et interagit avec des voies liées à BMP/TGF-β qui gouvernent la calcification, le remodelage et l’homéostasie de la matrice extracellulaire. Une expression dérégulée de la MGP ou des altérations de son état de carboxylation sont associées à des phénotypes de calcification pathologique observés dans des contextes cardiovasculaires et de tissus conjonctifs, ce qui en fait un levier moléculaire utile pour étudier les mécanismes de contrôle de la calcification. En tant que facteur circulant et associé à la matrice, la MGP est également exploitée comme gène lié à des biomarqueurs dans des études mécanistiques du métabolisme minéral et du vieillissement tissulaire.

MGP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MGP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MGP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MGP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MGP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MGP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MGP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MGP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MGP dans les cellules tumorales présentant une expression de MGP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.