mGluR-8a/b/c CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420695

Übersicht

Grm8 kodiert den metabotropen Glutamatrezeptor 8 (mGluR-8a/b/c), einen GPCR der Gruppe III, der überwiegend an Gi/o-Proteine koppelt, um die Adenylylcyclase-Aktivität zu verringern, die cAMP/PKA-Signalübertragung zu modulieren und die präsynaptische Neurotransmitterfreisetzung zu regulieren. Die Aktivität von mGluR8 beeinflusst die synaptische Transmission und Plastizität, indem sie die Funktion von Ionenkanälen und die Wahrscheinlichkeit der Vesikelfreisetzung fein abstimmt und so glutamaterge Signale über neuronale Schaltkreise hinweg integriert. Bei der Maus wird Grm8 im Kontext des Gleichgewichts zwischen exzitatorischer und inhibitorischer Aktivität sowie schaltkreisweiter Mechanismen untersucht, die sensorische Verarbeitung, Lernen und stressabhängige Verhaltensweisen prägen. Fehlregulierte Glutamatrezeptor-Signalgebung, einschließlich mGluRs der Gruppe III, wird in experimentellen Modellen häufig im Hinblick auf ihre Beiträge zu neuroentwicklungsbedingten und neuropsychiatrischen Phänotypen untersucht.

Das mGluR-8a/b/c CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Grm8-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Grm8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Grm8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die mGluR-8a/b/c-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Grm8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der mGluR-8a/b/c-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Grm8-Exone abzielen, die für die mGluR-8a/b/c-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Grm8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom mGluR-8a/b/c CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom mGluR-8a/b/c CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Grm8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das mGluR-8a/b/c HDR-Plasmid (m) und mGluR-8a/b/c HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Grm8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Grm8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.