mGluR-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406953

Übersicht

GRM7 kodiert den metabotropen Glutamatrezeptor 7 (mGluR-7), einen GPCR der Klasse C, der hauptsächlich an Gi/o-Proteine koppelt, um die Adenylylcyclase-Aktivität zu verringern und die Funktion von Ionenkanälen zu modulieren. mGluR-7 ist in präsynaptischen aktiven Zonen angereichert und wirkt als Auto- bzw. Heterorezeptor, der die Neurotransmitterfreisetzung dämpft und die synaptische Übertragung sowie Plastizität über die cAMP/PKA-Signalkaskade und nachgeschaltete MAPK/ERK‑Signalwege feinabstimmt. Aufgrund seiner Rolle bei der Regulation des exzitatorisch–inhibitorischen Gleichgewichts und der Erregbarkeit neuronaler Schaltkreise wird GRM7 häufig im Zusammenhang mit neuroentwicklungsbedingten und neuropsychiatrischen Phänotypen sowie mit Mechanismen der Anfallsanfälligkeit und stressbezogenen Verhaltensweisen untersucht. Die Signalübertragung von humanem mGluR-7 ist zudem für die synaptische Organisation und das aktivitätsabhängige Remodeling relevant, was ihn zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Analyse von Signalwegen in neuronalen Modellen macht.

Das mGluR-7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GRM7-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GRM7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GRM7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die mGluR-7-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GRM7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der mGluR-7-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GRM7-Exone abzielen, die für die mGluR-7-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GRM7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom mGluR-7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom mGluR-7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GRM7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das mGluR-7 HDR-Plasmid (h) und mGluR-7 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GRM7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GRM7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.