mGluR-1a Double Nickase Plasmid (h): sc-401436-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das mGluR-1a Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- mGluR-1a Double-Nickase-Plasmid (h) und mGluR-1a Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GRM1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
mGluR-1a Double Nickase Plasmid (h) | sc-401436-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
mGluR-1a Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401436-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRM1 kodiert den metabotropen Glutamatrezeptor mGluR-1a, einen GPCR der Klasse C, der vor allem an Gq/11 koppelt und dadurch die Phospholipase Cβ, das Inositoltrisphosphat-/Diacylglycerol-(IP₃/DAG)-Signalwege, die Mobilisierung von intrazellulärem Ca²⁺ sowie die Aktivierung der Proteinkinase C stimuliert. mGluR-1a aktiviert außerdem MAPK/ERK- und PI3K-gekoppelte Signalwege und beeinflusst die synaptische Transmission und Plastizität durch Modulation von Ionenkanälen und der Neurotransmitterfreisetzung. In humanen Geweben wird die GRM1-abhängige Signalübertragung im Zusammenhang mit der Regulation neuronaler Schaltkreise und der exzitatorischen Neurotransmission untersucht; genetische und funktionelle Störungen werden mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht. Eine Fehlregulation der mGluR-1a-Aktivität wird zudem hinsichtlich ihrer Auswirkungen auf zelluläre Signalnetzwerke untersucht, die für Proliferation, Differenzierung und Stressantworten relevant sind.
mGluR-1a Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GRM1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GRM1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GRM1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GRM1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.