MFSD2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405672-ACT

MFSD2A codifica a MFSD2, um transportador dependente de sódio de lisofosfatidilcolinas que medeia a captação de ácido docosa-hexaenoico (DHA) através de barreiras endoteliais, com papel de destaque na barreira hematoencefálica. Ao regular o influxo de lípidos e a composição de fosfolípidos de membrana, a MFSD2A sustenta o neurodesenvolvimento, a manutenção neuronal e a integridade da barreira, integrando-se em vias mais amplas de transporte de lípidos e de homeostase metabólica. A MFSD2A também contribui para a supressão da transcitose vesicular no endotélio cerebral, ligando a sua atividade ao controlo do tráfego endotelial e a uma função de barreira mais estanque. Alterações na expressão ou na função da MFSD2A têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e a desregulação da permeabilidade da barreira, tornando-a relevante para estudos do metabolismo lipídico no SNC e da biologia endotelial.

MFSD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MFSD2A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MFSD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MFSD2A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MFSD2A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MFSD2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MFSD2A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MFSD2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MFSD2 em células tumorais com expressão de MFSD2A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.