Plásmido Doble Nickase (h) Metallothionein 1F: sc-417937-NIC

MT1F codifica la metalotioneína 1F, una proteína de bajo peso molecular rica en cisteína y capaz de unirse a metales, que contribuye a la homeostasis intracelular de oligoelementos esenciales como el zinc y el cobre, y al secuestro de metales tóxicos como el cadmio y el mercurio. Al amortiguar las reservas lábiles de zinc, MT1F puede influir en el equilibrio redox, en la actividad de enzimas dependientes de metales y en programas transcripcionales sensibles al estrés oxidativo y electrófilo. Los miembros de la familia de las metalotioneínas se asocian comúnmente con vías de adaptación al estrés celular y pueden modular la sensibilidad a la exposición a metales y a las especies reactivas de oxígeno mediante química redox basada en tioles. Se han descrito alteraciones en la expresión de MT1F en múltiples contextos relevantes para enfermedades, incluidos cambios asociados al cáncer en el metabolismo de metales y en la señalización de estrés oxidativo, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de respuestas al estrés y biología de la desintoxicación.

Metallothionein 1F El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MT1F en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MT1F. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MT1F. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MT1F alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.