Plasmide Double Nickase (h) MerTK: sc-401629-NIC

MERTK code la tyrosine kinase réceptrice MerTK, membre de la famille TAM, qui régule l’efférocytose et l’homéostasie immunitaire en reconnaissant la phosphatidylsérine via des ligands passerelles tels que GAS6 et PROS1. L’activation de MerTK déclenche en aval les voies PI3K–AKT, MAPK/ERK et STAT, orientant les programmes de clairance des macrophages et des microglies, limitant la production de cytokines inflammatoires et favorisant le remodelage tissulaire. En biologie du cancer, une signalisation aberrante de MerTK a été associée à la survie des cellules tumorales, à leur invasivité et à l’échappement immunitaire au sein du microenvironnement tumoral. Dans le système nerveux et la rétine, la phagocytose dépendante de MerTK intervient dans l’élimination des débris et la régulation de l’inflammation, offrant un cadre pour étudier les dérégulations des voies de l’immunité innée associées aux maladies.

MerTK Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MERTK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MERTK. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MERTK. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MERTK.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.