Plásmido CRISPR de Activación (h) MEK Kinase 1: sc-401107-ACT

El gen humano MAP3K1 codifica la MEK quinasa 1 (MEKK1), una MAP quinasa quinasa quinasa (MAP3K) de serina/treonina que integra señales procedentes de factores de crecimiento, citocinas y estrés celular para regular las cascadas MAPK aguas abajo. MEKK1 conecta señales ascendentes con las vías de señalización MKK4/7–JNK y MKK3/6–p38, e influye en programas transcripcionales que controlan la proliferación, la apoptosis, la diferenciación y las respuestas inflamatorias. Por sus funciones reguladoras en las vías de quinasas activadas por estrés y en la remodelación del citoesqueleto, MAP3K1 se estudia con frecuencia en contextos de reconfiguración anómala de redes de señalización. La actividad alterada de MAP3K1 se ha vinculado con una salida desregulada de la vía MAPK relevante para la oncología, los trastornos del desarrollo y fenotipos de señalización inmunitaria en entornos de investigación mecanística.

MEK Kinase 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAP3K1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MEK Kinase 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAP3K1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAP3K1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MEK Kinase 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAP3K1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MEK Kinase 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MEK Kinase 1 en células tumorales con expresión de MAP3K1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.