Plásmido Doble Nickase (m) MEK-5: sc-423906-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)MEK-5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa MEK-5 (m) y el plásmido de doble nickasa MEK-5 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Map2k5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MEK-5 Anticuerpo (E-3): sc-365198
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) MEK-5 | sc-423906-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) MEK-5 | sc-423906-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Map2k5 codifica la quinasa de doble especificidad MEK-5, una quinasa de MAPK que activa preferentemente ERK5/MAPK7 dentro de la red de señalización MAPK. La señalización MEK-5–ERK5 regula la transcripción dependiente de estímulos, la organización del citoesqueleto y programas de supervivencia celular, con funciones establecidas en las respuestas a factores de crecimiento y al estrés celular. En sistemas murinos, esta vía se utiliza ampliamente para investigar mecanismos de proliferación y diferenciación en múltiples contextos tisulares. La desregulación de la señalización MEK-5/ERK5 se ha asociado con alteraciones de la señalización inflamatoria y fenotipos oncogénicos, lo que respalda su relevancia para modelar la biología de enfermedades dependiente de esta vía.
MEK-5 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Map2k5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Map2k5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Map2k5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Map2k5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.