Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MEK-5 Double Nickase Plasmid (h): sc-401688-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MEK-5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MEK-5 Double-Nickase-Plasmid (h) und MEK-5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MAP2K5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MEK-5: sc-365198
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MEK-5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401688-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MEK-5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401688-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MAP2K5 kodiert MEK-5, eine dual-spezifische MAP-Kinase-Kinase, die bevorzugt ERK5 (MAPK7) phosphoryliert und aktiviert, um Transkriptionsprogramme zu regulieren, die mit Proliferation, Differenzierung, Stressanpassung und Zytoskelett-Remodelling verknüpft sind. Die MEK-5–ERK5-Signalkaskade integriert Signale aus Wachstumsfaktor- und Umweltreizen und beeinflusst nachgeschaltete Faktoren wie Transkriptionsregulatoren der MEF2-Familie, wodurch Zellüberlebens- und Motilitätsantworten geprägt werden. Eine Fehlregulation der MAP2K5/ERK5-Achse wurde mit veränderter Signaltransduktion in Kontexten wie der Umverdrahtung onkogener Signalwege, der kardiovaskulären Biologie und entzündlicher Signalgebung in Verbindung gebracht, was MAP2K5 zu einem nützlichen Knotenpunkt macht, um Crosstalk zwischen Signalwegen zu untersuchen. In humanen Zellmodellen ermöglicht die gezielte Beeinflussung der MEK-5-Aktivität mechanistische Studien zur Spezifität von MAPK-Netzwerken und zu kompensatorischer Signalgebung über parallele MAPK-Kaskaden hinweg.
MEK-5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MAP2K5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MAP2K5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MAP2K5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MAP2K5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.