Plasmide Double Nickase (h) MEK-5: sc-401688-NIC

MAP2K5 code MEK-5, une MAP kinase kinase à double spécificité qui phosphoryle et active préférentiellement ERK5 (MAPK7) afin de réguler des programmes transcriptionnels liés à la prolifération, à la différenciation, à l’adaptation au stress et au remodelage du cytosquelette. La signalisation MEK-5–ERK5 intègre des signaux issus des facteurs de croissance et de l’environnement et influence des effecteurs en aval tels que les régulateurs transcriptionnels de la famille MEF2, modulant ainsi les réponses de survie cellulaire et de motilité. Une dérégulation de l’axe MAP2K5/ERK5 a été associée à une transduction du signal altérée dans divers contextes, notamment le remodelage de voies oncogéniques, la biologie cardiovasculaire et la signalisation inflammatoire, faisant de MAP2K5 un nœud utile pour disséquer les interactions entre voies de signalisation. Dans des modèles de cellules humaines, la perturbation de l’activité de MEK-5 permet des études mécanistiques sur la spécificité des réseaux MAPK et la signalisation compensatoire entre cascades MAPK parallèles.

MEK-5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MAP2K5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MAP2K5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MAP2K5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MAP2K5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.