Med6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403204

Descripción general

MED6 codifica Med6, una subunidad esencial del complejo Mediator que sirve de puente entre factores de transcripción específicos de secuencia y la ARN polimerasa II para coordinar el inicio de la transcripción y la capacidad de respuesta de los promotores. Al favorecer el ensamblaje y la estabilidad de la maquinaria de preiniciación, Med6 contribuye a la regulación de programas de expresión génica del estado celular, incluidas vías que controlan la proliferación, la diferenciación y la transcripción adaptativa al estrés. La alteración de la función de Mediator puede remodelar las salidas transcripcionales globales y se estudia con frecuencia en el contexto de la señalización oncogénica, la desregulación del desarrollo y la inestabilidad genómica vinculada a la transcripción. Por lo tanto, la perturbación de MED6 proporciona un punto de entrada manejable para analizar cómo la transcripción dependiente de Mediator integra señales en la cromatina y en la actividad de la ARN polimerasa II en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Med6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MED6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MED6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MED6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Med6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MED6 para la investigación de la señalización de Med6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MED6 críticos para la función de Med6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MED6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Med6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Med6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MED6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Med6 (h) y el plásmido HDR Med6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MED6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MED6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.