Plasmide CRISPR d'Activation (h) Med15: sc-405129-ACT

Le gène humain **MED15** code **Med15**, une sous-unité centrale du complexe coactivateur transcriptionnel **Mediator**, qui relie des facteurs de transcription spécifiques de séquence à l’ARN polymérase II afin de réguler des programmes d’expression génique. Med15 soutient une transcription dépendante des stimuli et intègre des signaux qui modulent l’état de la chromatine ainsi que la communication entre promoteurs et enhancers, influençant des processus tels que le contrôle du cycle cellulaire, les réponses au stress et la différenciation. Une activité altérée de **MED15** a été associée à la reprogrammation transcriptionnelle observée dans plusieurs contextes pathologiques, notamment des voies pertinentes en cancérologie qui dépendent d’une transcription Mediator-dépendante. En conséquence, **MED15** est fréquemment étudié pour son rôle dans la régulation de réseaux géniques spécifiques de voies et de la plasticité transcriptionnelle dans des modèles cellulaires humains.

Med15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MED15 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Med15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MED15 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MED15, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Med15. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MED15 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Med15 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Med15 dans les cellules tumorales présentant une expression de MED15 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.