Particules Lentivirales d'Activation (h) MDC1: sc-405652-LAC

Le médiateur du point de contrôle des dommages à l’ADN 1 (MDC1) est une protéine nucléaire d’échafaudage qui coordonne la réponse aux dommages de l’ADN en se liant à γH2AX au niveau des cassures double brin et en amplifiant la signalisation des points de contrôle. En recrutant et en stabilisant des facteurs de réparation et de signalisation, notamment ATM, les ligases ubiquitine RNF8/RNF168 et des complexes associés à 53BP1/BRCA1, MDC1 favorise le remodelage de la chromatine, la formation de foyers de dommage et un choix efficace de voie entre la jonction d’extrémités non homologues et la recombinaison homologue. L’activité de MDC1 s’articule avec le contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire et les programmes de maintien du génome qui protègent contre le stress réplicatif et l’instabilité chromosomique. Une dérégulation de la signalisation dépendante de MDC1 a été associée à une diminution de la capacité de réparation de l’ADN et à des phénotypes d’instabilité génomique pertinents pour la biologie des cancers et la sensibilité aux agents provoquant des dommages à l’ADN.

Les particules d'activation lentivirales MDC1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MDC1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MDC1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MDC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MDC1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MDC1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.