MCM8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-413655

Übersicht

MCM8 kodiert ein konserviertes Minichromosome-Maintenance-Protein, das mit MCM9 einen funktionellen Komplex bildet, der die Vollendung der DNA-Replikation und die durch homologe Rekombination vermittelte Reparatur fördert, insbesondere während der Erholung von Replikationsstress. MCM8 trägt zur Endresektion von DNA und zur Verarbeitung gestauter oder kollabierter Replikationsgabeln bei und ist damit mit der Aufrechterhaltung der Genomstabilität sowohl während der S‑Phase als auch im Kontext der meiotischen Rekombination verknüpft. Eine Störung der MCM8-Funktion wurde mit einer beeinträchtigten Reparatur von Doppelstrangbrüchen, erhöhter chromosomaler Instabilität und einer erhöhten Anfälligkeit für replikationsassoziierte DNA-Schäden in Verbindung gebracht. Genetische Veränderungen in MCM8 wurden bei Infertilität und vorzeitiger Ovarialinsuffizienz beschrieben und sind zudem relevant für mechanistische Studien der Tumorentstehung, die durch defekte DNA-Reparaturwege angetrieben wird.

Das MCM8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MCM8-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MCM8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MCM8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MCM8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MCM8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MCM8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MCM8-Exone abzielen, die für die MCM8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MCM8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MCM8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MCM8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MCM8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MCM8 HDR-Plasmid (h) und MCM8 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MCM8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MCM8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.