Plasmide Double Nickase (h) MCM3: sc-402076-NIC

MCM3 code pour le composant 3 du complexe de maintenance des minichromosomes, une sous-unité essentielle de l’hélicase MCM2–7, indispensable à l’octroi des origines de réplication (« origin licensing ») et à la progression des fourches de réplication de l’ADN pendant la phase S. En tant qu’élément du complexe de pré-réplication, MCM3 coopère avec CDC45 et GINS pour favoriser l’assemblage du réplisome, assurant la stabilité du génome et la duplication fidèle des chromosomes. Une perturbation de la dynamique de réplication dépendante de MCM3 peut induire un stress réplicatif, altérer les points de contrôle du cycle cellulaire et entraîner une accumulation de dommages à l’ADN, des processus fréquemment étudiés dans le contexte de la biologie du cancer et des troubles prolifératifs. MCM3 est donc largement utilisé comme point d’entrée mécanistique pour étudier le contrôle de la réplication de l’ADN, les réponses au stress réplicatif et la régulation du cycle cellulaire.

MCM3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MCM3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MCM3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MCM3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MCM3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.