Plasmide CRISPR d'Activation (h) MCAT: sc-404338-ACT

Le gène humain **MCAT** code une malonyl-CoA:ACP transférase mitochondriale, composant essentiel de la voie de synthèse des acides gras mitochondriaux (mtFAS), qui transfère des groupements malonyle sur la protéine porteuse d’acyle (ACP) afin de soutenir l’élongation *de novo* des chaînes acyles. Cette activité est nécessaire à la production d’octanoyl-ACP, un précurseur clé de la lipoylation des protéines, reliant ainsi la fonction de MCAT à la régulation des complexes pyruvate déshydrogénase et α‑cétoglutarate déshydrogénase, ainsi qu’au métabolisme énergétique mitochondrial au sens large. Par son rôle dans le maintien du métabolisme oxydatif et de l’homéostasie mitochondriale, une expression ou une activité altérée de MCAT a été associée à des phénotypes de dysfonction mitochondriale, et MCAT est étudié dans le contexte du stress métabolique, du remodelage bioénergétique et des mécanismes des maladies neuro‑métaboliques.

MCAT Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MCAT sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MCAT Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MCAT dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MCAT, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MCAT. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MCAT natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MCAT au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MCAT dans les cellules tumorales présentant une expression de MCAT silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.