MC3-R CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403341-ACT

MC3R kodiert den Melanocortin-3-Rezeptor (MC3-R), einen G‑Protein-gekoppelten Rezeptor, der auf Melanocortin-Peptide reagiert und so die Energiehomöostase, die Nährstoffverteilung (Nutrient Partitioning) und die neuroendokrine Signalübertragung reguliert. Nach Ligandenbindung koppelt MC3-R überwiegend an Gs, erhöht dadurch cAMP und aktiviert PKA/CREB-abhängige Transkriptionsprogramme, mit nachgelagerten Effekten auf hypothalamische Schaltkreise und den peripheren Stoffwechsel. Die MC3R-Aktivität ist mit Signalwegen verknüpft, die Appetit, zirkadiane sowie ernährungsbezogene Verhaltensweisen und Entzündungsreize in metabolischen Geweben integrieren. Genetische und funktionelle Störungen von MC3R wurden mit Phänotypen der Körpergewichtsregulation und metabolischer Dysfunktion in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für Studien zur Adipositas-Biologie und zu verwandten kardiometabolischen Merkmalen unterstreicht.

MC3-R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MC3R-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MC3-R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MC3R-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MC3R-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MC3-R-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MC3R-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MC3-R-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MC3-R-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MC3R-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.