MBL-C Double Nickase Plasmid (h): sc-403131-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MBL-C Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MBL-C Double-Nickase-Plasmid (h) und MBL-C Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MBL2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MBL-C Double Nickase Plasmid (h) | sc-403131-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MBL-C Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403131-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MBL2 kodiert Mannose-bindendes Lektin (MBL‑C), ein lösliches Mustererkennungsprotein, das den Lektinweg des Komplementsystems einleitet, indem es mikrobielle Kohlenhydratmotive bindet und MASP-Proteasen aktiviert. Durch Opsonisierung und Verstärkung der Komplementkaskade trägt MBL‑C zur angeborenen Immunüberwachung, zur Beseitigung apoptotischen Materials und zur Modulation des Entzündungsniveaus an mukosalen und systemischen Orten bei. Veränderungen in der MBL2-Expression oder in der Oligomerisierungsfähigkeit wurden mit einer veränderten Infektanfälligkeit und fehlregulierten Entzündungsreaktionen in Verbindung gebracht; zudem wird MBL2 häufig als Modifikator von Immunphänotypen in der Sepsis, bei Autoimmunerkrankungen und in Kontexten chronisch-entzündlicher Erkrankungen untersucht. Als zirkulierende Komponente, die hauptsächlich von Hepatozyten produziert wird, liefert MBL‑C außerdem einen gut messbaren Parameter zur Untersuchung sekretierter Immunmediatoren, der Dynamik der Komplementaktivierung und von Signalwegen der Wirt–Pathogen-Interaktion.
MBL-C Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MBL2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MBL2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MBL2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MBL2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.