MBD3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421578

Descripción general

Mbd3 codifica la proteína 3 del dominio de unión a metil-CpG (MBD3), una subunidad central del complejo NuRD (remodelación de nucleosomas y desacetilasa) que integra la remodelación de la cromatina dependiente de ATP con la desacetilación de histonas para regular programas transcripcionales. En células de ratón, MBD3 contribuye al control epigenético de la especificación de linaje, las transiciones de pluripotencia y la organización de la cromatina acoplada a la replicación al coordinar la accesibilidad de promotores y potenciadores. A través de la represión dependiente de NuRD y el ajuste fino de redes génicas del desarrollo, MBD3 influye en las decisiones de destino celular y la estabilidad del genoma. La desregulación de la actividad de MBD3/NuRD se ha vinculado a estados de diferenciación alterados y a una desregulación transcripcional relevante para fenotipos del desarrollo y la remodelación epigenética asociada al cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MBD3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Mbd3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Mbd3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Mbd3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MBD3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Mbd3 para la investigación de la señalización de MBD3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Mbd3 críticos para la función de MBD3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Mbd3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MBD3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MBD3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Mbd3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MBD3 (m) y el plásmido HDR MBD3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Mbd3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Mbd3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.