Plasmide CRISPR d'Activation (h) MB67: sc-401537-ACT

NR1I3 code le récepteur nucléaire MB67 (CAR), un facteur de transcription sensible aux ligands qui régule la détection des xénobiotiques et les réponses métaboliques adaptatives dans les cellules humaines. Après activation, MB67 forme un hétérodimère avec RXR et se lie à des éléments régulateurs afin de contrôler l’expression d’enzymes et de transporteurs impliqués dans le métabolisme des médicaments, en intégrant des voies telles que la biotransformation médiée par les cytochromes P450, les réactions de conjugaison, ainsi que l’homéostasie des acides biliaires et de la bilirubine. Par des interactions croisées avec des réseaux de signalisation inflammatoires et métaboliques, NR1I3 influence les réponses au stress des hépatocytes et la gestion systémique des lipides et du glucose. Une activité dérégulée de NR1I3 a été associée à la variabilité interindividuelle de la réponse aux médicaments et à la susceptibilité à des phénotypes métaboliques et hépatiques, ce qui soutient son utilisation dans des études mécanistiques sur la détoxification et la régulation endocrino‑métabolique.

MB67 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NR1I3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MB67 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NR1I3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NR1I3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MB67. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NR1I3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MB67 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MB67 dans les cellules tumorales présentant une expression de NR1I3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.