matrin-3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-418085-ACT

MATR3 kodiert Matrin-3, ein RNA/DNA-bindendes Protein der nukleären Matrix, das zur nukleären Architektur beiträgt und die Genexpression durch Interaktionen mit Chromatin und Ribonukleoprotein-Komplexen koordiniert. Matrin-3 ist an RNA-Spleißen, mRNA-Stabilisierung und nukleärer Retention beteiligt und steht damit in Verbindung mit der Regulation der Transkriptverarbeitung sowie stressresponsiven Genprogrammen. Sein funktionelles Netzwerk überschneidet sich mit Signalwegen, die den RNA-Stoffwechsel und die nukleozytoplasmatische Organisation steuern – Prozesse, die bei Neurodegeneration häufig gestört sind. Eine fehlregulierte MATR3-Aktivität und pathogene Varianten wurden mit Motoneuronerkrankungen und verwandten neuromuskulären Phänotypen in Verbindung gebracht, was MATR3 als mechanistischen Knotenpunkt für die Untersuchung der Biologie RNA-bindender Proteine stützt.

matrin-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MATR3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

matrin-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MATR3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MATR3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen matrin-3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MATR3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von matrin-3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des matrin-3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MATR3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.