Plasmide CRISPR/Cas9 KO Matrilin-2 (h): sc-404852

Présentation

MATN2 code la matriline-2, une glycoprotéine adaptatrice multidomaine de la matrice extracellulaire (MEC) qui participe à l’assemblage et à la stabilisation de réseaux filamenteux en faisant le lien entre les collagènes, les protéoglycanes et d’autres constituants de la matrice. La matriline-2 soutient l’architecture tissulaire et la communication cellule–matrice, lesquelles influencent l’adhésion, la migration et la mécanotransduction, des processus étroitement liés aux programmes de remodelage de la MEC. Par son rôle dans l’organisation de la matrice, MATN2 est pertinente pour les études de biologie musculosquelettique et des tissus conjonctifs, ainsi que dans des contextes plus larges où la composition de la MEC module l’inflammation et la réparation des plaies. Une homéostasie de la MEC perturbée impliquant MATN2 a été associée à un remodelage pathologique et à des phénotypes de type fibrotique dans de multiples tissus, ce qui motive des investigations mécanistiques dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Matrilin-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MATN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MATN2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MATN2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Matrilin-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MATN2 pour l'étude de la signalisation de Matrilin-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MATN2 essentiels à la fonction de Matrilin-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MATN2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Matrilin-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Matrilin-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MATN2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Matrilin-2 plasmide HDR (h) et le Matrilin-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MATN2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MATN2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.