Particules Lentivirales d'Activation (h) MATH-5: sc-415110-LAC

ATOH7 code pour le facteur de transcription bHLH (basic helix-loop-helix) MATH-5, un régulateur clé de la compétence neurogénique et de la spécification de la lignée des cellules ganglionnaires rétiniennes au cours du développement de l’œil humain. MATH-5 intègre des programmes transcriptionnels proneuronaux avec la voie Notch et d’autres signaux du développement afin de coordonner la sortie du cycle cellulaire et la différenciation neuronale. Une activité dérégulée d’ATOH7 a été associée à une formation altérée du nerf optique et à une susceptibilité accrue aux neuropathies optiques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du développement rétinien et des troubles du système visuel. Comme il agit en amont de multiples déterminants du destin neuronal, ATOH7 est largement utilisé pour explorer les réseaux de régulation génique contrôlant la neurogenèse et l’identité des cellules rétiniennes.

Les particules d'activation lentivirales MATH-5 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ATOH7 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MATH-5 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ATOH7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MATH-5. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ATOH7 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.