Maspin Double Nickase Plasmid (h): sc-416693-NIC

SERPINB5 kodiert Maspin, ein nichtklassisches Mitglied der Serinprotease-Inhibitorfamilie, das als kontextabhängiger Regulator der Adhäsion, Motilität und extrazellulären Matrix-Interaktionen epithelialer Zellen fungiert. Maspin beeinflusst die Umgestaltung des Zytoskeletts sowie Zell–Matrix-Signalprogramme, die mit Migration und Invasion verknüpft sind, und es wurde berichtet, dass es über Interaktionen mit nukleären und zytoplasmatischen Partnern Antworten auf oxidativen Stress und eine chromatinassoziierte Regulation moduliert. Veränderungen der SERPINB5-Expression und der subzellulären Lokalisation wurden in mehreren Gewebetypen mit Phänotypen der Tumorprogression in Verbindung gebracht, was SERPINB5 zu einem nützlichen molekularen Knotenpunkt für die Untersuchung von Mechanismen metastasebezogenen Zellverhaltens macht. Als biomarkerassoziiertes Gen in der Krebsbiologie wird SERPINB5 häufig in Modellen der epithelialen Differenzierung, Invasion und des mikroenvironmentalen Remodellings untersucht.

Maspin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SERPINB5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SERPINB5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SERPINB5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SERPINB5-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.