Plásmido Doble Nickase (m) MARCH8: sc-428061-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)MARCH8 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa MARCH8 (m) y el plásmido de doble nickasa MARCH8 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a March8. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) MARCH8 | sc-428061-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) MARCH8 | sc-428061-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
March8 codifica MARCH8, una ligasa E3 de ubiquitina tipo RING-CH asociada a membrana que se localiza principalmente en membranas endosomales y del trans-Golgi, y regula el tráfico y el recambio dependientes de la ubiquitinación de múltiples proteínas de la superficie celular e intracelulares. Al promover la clasificación mediada por ubiquitina hacia la degradación lisosomal, MARCH8 ayuda a controlar la abundancia de receptores, las salidas de señalización inmunitaria y el control de calidad de proteínas de membrana dentro del sistema endolisosomal. En modelos murinos, MARCH8 se ha relacionado con vías que gobiernan la presentación de antígenos, la restricción inmunitaria innata de virus envueltos y la modulación de receptores de señalización mediante procesos asociados al sistema ubiquitina–proteasoma y al lisosoma. La ubiquitinación y el tráfico de membranas desregulados son ampliamente relevantes para fenotipos inflamatorios e interacciones patógeno–hospedador, lo que convierte a March8 en un locus útil para estudios mecanísticos de la regulación inmunitaria y la homeostasis proteica.
MARCH8 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus March8 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de March8. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de March8. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con March8 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.