MAPK15 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406816-ACT

MAPK15 (auch bekannt als ERK7/ERK8) ist eine atypische mitogenaktivierte Proteinkinase, die kinasespezifische Signalwege reguliert, die mit zellulären Stressantworten, der Kontrolle der Proliferation und dem intrazellulären Transport verknüpft sind. MAPK15 wird mit der Modulation von Autophagie- und Ziliogenese-assoziierten Prozessen in Verbindung gebracht und integriert Signale, die den Zellzyklusverlauf und die Proteostase beeinflussen. Die MAPK15-Aktivität überschneidet sich mit MAPK-Signalnetzwerken und kann die phosphorylierungsabhängige Steuerung von Transkriptionsprogrammen sowie die Organisation des Zytoskeletts mitprägen. Eine dysregulierte MAPK15-Expression oder -Signalübertragung wurde mit veränderten Wachstumsphänotypen assoziiert und wird im Kontext der Krebsbiologie sowie anderer Erkrankungen mit gestörter Signalhomöostase untersucht.

MAPK15 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAPK15-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MAPK15 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAPK15-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAPK15-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MAPK15-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAPK15-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MAPK15-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MAPK15-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAPK15-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.