MANEAL Lentiviral Activation Particles (h): sc-414652-LAC

Das humane MANEAL (Mannosidase alpha class 1A member 2-like) kodiert ein mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziiertes Protein, das an der Reifung und Qualitätskontrolle von Glykoproteinen im frühen sekretorischen Weg beteiligt ist. Durch seine Mitwirkung an Prozessen der N-Glykan-Verarbeitung und der ER-Homöostase kann MANEAL den Transport und die Stabilität neu synthetisierter Membran- und sekretierter Proteine beeinflussen. Störungen in ER-abhängigen Qualitätskontrollwegen für Glykoproteine sind allgemein relevant für zelluläre Stressantworten, ein Ungleichgewicht der Proteostase und veränderte Signalgebung, die in mehreren Geweben zu krankheitsassoziierten Phänotypen beitragen können. Daher ist MANEAL für mechanistische Studien von Interesse, die glykansabhängige Proteinverarbeitung mit einer Umgestaltung von Signalwegen unter Stress- oder Differenzierungsbedingungen verknüpfen.

MANEAL Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente MANEAL-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

MANEAL Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der MANEAL-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen MANEAL-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen MANEAL-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.