MALT1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400791-ACT

Humanes MALT1 (mucosa-assoziiertes lymphatisches Gewebe, Lymphom-Translokationsprotein 1) ist eine Paracaspase, die als zentraler Signalknoten stromabwärts von Antigenrezeptoren in Lymphozyten fungiert und Signale aus dem CARD11–BCL10–MALT1-(CBM)-Komplex integriert, um die Aktivierung des kanonischen NF-κB- sowie des MAPK-Signalwegs anzutreiben. Über seine Scaffold-Funktion hinaus spaltet die MALT1-Protease ausgewählte Substrate, um die Aktivierung von T- und B-Zellen, die Zytokinproduktion und Überlebensprogramme feinzujustieren. Eine fehlregulierte MALT1-Signalgebung ist mit aberranter Immunaktivierung verknüpft und spielt durch veränderte NF-κB-abhängige Transkriptionsprogramme eine Rolle in der Biologie lymphoider Malignome. Die Modulation der MALT1-Expression ist daher hilfreich, um signalabhängige Transkription, die Verschaltung von Immunrezeptor-Signalwegen und kontextspezifische Regulation inflammatorischer Gene zu untersuchen.

MALT1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MALT1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MALT1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MALT1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MALT1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MALT1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MALT1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MALT1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MALT1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MALT1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.