Plásmido CRISPR de Activación (h) MAL: sc-403024-ACT

El gen humano **MAL** codifica un proteolípido tetraspan altamente hidrofóbico, enriquecido en microdominios de membrana ricos en glicoesfingolípidos y colesterol, donde contribuye al tráfico hacia la membrana apical, la clasificación vesicular y la estabilización de dominios de membrana especializados. MAL participa en el transporte polarizado en epitelios y está implicado en la organización de las balsas lipídicas, que influyen en la localización de receptores y la propagación de señales en la membrana plasmática. Su expresión depende del linaje celular y del estado de diferenciación, lo que lo convierte en un marcador útil de estados celulares epiteliales y linfoides y para estudiar la compartimentalización de membranas. Se ha informado de una expresión desregulada de MAL en múltiples contextos de cáncer y en procesos de remodelación epitelial, lo que respalda la investigación sobre cómo los cambios en el tráfico y en la dinámica de las balsas lipídicas se relacionan con la señalización oncogénica y la polaridad celular.

MAL El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAL sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MAL El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAL en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MAL. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAL y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MAL en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MAL en células tumorales con expresión de MAL silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.