MAF1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-418170-LAC

MAF1 ist ein konservierter Transkriptionsrepressor, der Nährstoff- und Stresssignale mit der Aktivität der RNA-Polymerase III koppelt und dadurch die Synthese von tRNAs und anderen kleinen nichtkodierenden RNAs moduliert, die für die Proteinsynthesekapazität erforderlich sind. Seine Aktivität wird über eine Phosphorylierung nachgeschaltet zu PI3K–AKT–mTOR und verwandten Signalwegen reguliert, wodurch Zellen ihren biosynthetischen Bedarf während Wachstum, Hungerzuständen und Stressantworten anpassen können. Über die Kontrolle der Pol-III-Transkription und der translationalen Homöostase beeinflusst MAF1 Zellwachstum, metabolische Anpassung und Programme der Proteostase. Eine Fehlregulation der Pol-III-Aktivität und der übergeordneten mTOR-Signalnetzwerke, an denen MAF1 beteiligt ist, wird häufig in Kontexten wie onkogenem Wachstum, der Biologie metabolischer Erkrankungen und stressassoziierten Phänotypen untersucht.

MAF1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente MAF1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

MAF1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der MAF1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen MAF1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen MAF1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.