mAChR M2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402394

Panoramica

CHRM2 codifica il sottotipo M2 del recettore muscarinico dell’acetilcolina (mAChR M2), un GPCR accoppiato a Gi/o che attenua l’attività dell’adenilato ciclasi, riducendo il cAMP intracellulare e la conseguente segnalazione mediata da PKA. mAChR M2 modula anche la conduttanza dei canali ionici, influenzando l’eccitabilità di membrana e il rilascio di neurotrasmettitori nei circuiti neuronali, e regola le risposte cronotrope e inotrope nei cardiomiociti. Attraverso questi meccanismi, CHRM2 partecipa alla neurotrasmissione colinergica, al controllo autonomico e a reti di segnalazione più ampie dipendenti dai GPCR. In ambito di ricerca, una segnalazione muscarinica disregolata è stata associata a fenotipi dell’elettrofisiologia cardiaca e a processi neuropsichiatrici e cognitivi, rendendo CHRM2 un nodo utile per l’analisi delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO mAChR M2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CHRM2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CHRM2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CHRM2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina mAChR M2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CHRM2 per lo studio della segnalazione di mAChR M2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CHRM2 critici per la funzione di mAChR M2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CHRM2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal mAChR M2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal mAChR M2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CHRM2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal mAChR M2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR mAChR M2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CHRM2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CHRM2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.