mAChR M2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402394
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- mAChR M2 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico mAChR M2, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:mAChR M2 Anticorpo (M2-2-B3): sc-33712
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
mAChR M2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402394 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O CHRM2 codifica o subtipo M2 do receptor muscarínico de acetilcolina (mAChR M2), um GPCR acoplado a Gi/o que atenua a atividade da adenilil ciclase para reduzir o cAMP intracelular e a sinalização downstream mediada por PKA. O mAChR M2 também modula a condutância de canais iônicos, influenciando a excitabilidade da membrana e a liberação de neurotransmissores em circuitos neuronais, e regula respostas cronotrópicas e inotrópicas em cardiomiócitos. Por esses mecanismos, o CHRM2 participa da neurotransmissão colinérgica, do controle autonômico e de redes mais amplas de sinalização dependentes de GPCR. Em contextos de pesquisa, a desregulação da sinalização muscarínica tem sido associada a fenótipos de eletrofisiologia cardíaca e a processos neuropsiquiátricos e cognitivos, tornando o CHRM2 um alvo útil para a investigação de vias.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO mAChR M2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CHRM2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CHRM2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CHRM2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína mAChR M2.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CHRM2 para a investigação da sinalização de mAChR M2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CHRM2 críticos para a função mAChR M2
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CHRM2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo mAChR M2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo mAChR M2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CHRM2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo mAChR M2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR mAChR M2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CHRM2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CHRM2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.