Ly6G6d CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403030-ACT

LY6G6D kodiert Ly6G6d, ein über Glycosylphosphatidylinositol (GPI) verankertes Mitglied der Ly6/uPAR-Familie, das vor allem in immunbezogenen Kontexten angereichert ist und vermutlich Zell-Zell-Interaktionen an der Plasmamembran beeinflusst. Als oberflächenassoziiertes Protein wird Ly6G6d hinsichtlich seiner Rolle bei der Ausprägung der Signaltransduktion, der Organisation von Membran-Mikrodomänen und der Kommunikation von Immunzellen in entzündlichen sowie tumorassoziierten Mikroumgebungen untersucht. Eine veränderte LY6G6D-Expression wurde in mehreren Krebs- und Immunonkologie-Datensätzen berichtet, was seine Nutzung als molekularen Marker in Studien zur Immuninfiltration und zum Epithel–Immun-Crosstalk stützt. Diese Eigenschaften machen LY6G6D zu einem relevanten Ziel, um Signalwege zu analysieren, die die Regulation von Oberflächenantigenen mit Immun-Signaling und krankheitsassoziierten Transkriptionsprogrammen verknüpfen.

Ly6G6d Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LY6G6D-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Ly6G6d Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LY6G6D-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LY6G6D-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Ly6G6d-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LY6G6D-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Ly6G6d-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Ly6G6d-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LY6G6D-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.