Ly6G6d Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403030-ACT

LY6G6D codifica a Ly6G6d, um membro da família Ly6/uPAR ancorado por glicosilfosfatidilinositol (GPI), enriquecido em contextos relacionados ao sistema imune e que se acredita influenciar as interações célula–célula na membrana plasmática. Como proteína associada à superfície, a Ly6G6d é estudada por possíveis papéis na modulação da transdução de sinais, na organização de microdomínios de membrana e na comunicação entre células imunes em microambientes inflamatórios e associados a tumores. Alterações na expressão de LY6G6D foram relatadas em diversos conjuntos de dados de câncer e imunooncologia, sustentando seu uso como marcador molecular em estudos de infiltração imune e de crosstalk entre epitélio e sistema imune. Essas características tornam LY6G6D um alvo relevante para dissecar vias que conectam a regulação de antígenos de superfície à sinalização imune e a programas transcricionais associados a doenças.

Ly6G6d O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LY6G6D sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ly6G6d O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LY6G6D em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LY6G6D, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ly6G6d. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LY6G6D nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ly6G6d no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ly6G6d em células tumorais com expressão de LY6G6D silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.